弓形虫病是一种人兽共患的寄生虫病，在我国平均感染率为5.84%［1］。弓形虫(下简称Toxo)是专性细胞内寄生虫，病原检出率较低，所以免疫学检测仍是诊断本病的一种主要手段。本文以集试验载体和试验容器合一的白色PVC为载体，以快速Dot-ELISA法［2］检测各类血清的Toxo-IgG，结果如下。

　　1.　材料及方法

　　1.1　材料

　　1.1.1　抗原制备　用B36株弓形虫(中山医科大学陈观今教授惠赠)接种于小白鼠腹腔，3～4天处死小白鼠，以无菌生理盐水冲洗小白鼠腹腔，收集冲洗液，按文献［3］方法纯化速殖子及制备可溶性抗原(Toxo-Ag)，以考马斯亮兰G250法测蛋白含量，低温贮存备用。致敏白色PVC载体的蛋白含量为50μg/ml。每点抗原2μl。

　　1.1.2　载体　白色PVC系5乘以2孔平底凹孔板，孔径1cm，孔深0.5cm［2］。

　　1.1.3　试剂　抗原稀释液为pH 9.6碳酸盐缓冲液。血清、酶结合物稀释液及洗涤液为pH 7.4 PBS-NP40。HRP-羊抗人IgG按改良过碘酸钠法标记［4］，工作浓度1∶400。显色底物为4-氯-1-萘酚-H2O2。

　　1.1.4　试验血清　PCR检测证实Toxo为阳性血清12份(四川省计划生育研究所惠赠)；病原学证实为阳性的血吸虫病、华支睾吸虫病和疟疾血清及B超或CT证实为包虫病和囊虫病血清共444份；其他疾病及未知人群血清986份。试验血清稀释度1∶20。

　　1.2　方法

　　取预致敏Toxo-Ag的白色PVC板，每孔加PBS 100μl及待测(或参考)血清5μl，混匀，置25摄氏度上室温或37摄氏度温箱温育10min，倾去液体，加PBS快洗1次，自来水快洗5次，甩干水份，每孔滴 加酶结合物1～2滴，如上温育、洗涤，每孔滴加底物1～2滴，如上温度下显色3min，用自来水冲洗终止反应，判读结果。凡待测血清出现与参阳血清一致的兰紫色斑点者为阳性。无色或呈浅灰色斑点(环)者为阴性。

　　2　结果

　　2.1　最佳试验条件选择

　　经方阵试验选定：致敏载体的Toxo-Ag蛋白量50μg/ml，血清稀释度1∶20，酶结合物工作浓度1∶400，温育时间为25摄氏度以上室温或37摄氏度温箱10min，显色时间为25摄氏度以上温度下3min为本试验的最佳条件。

　　2.2　检测PCR阳性血清结果

　　共检测12份血清，Dot-ELISA全部为阳性，反应强度“+”5份，“++”7份。

　　2.3　不同人群血清检测结果

　　2.3.1　已知寄生虫病人血清　检测阳性率分别为：血吸虫病16.2%(53/328)，包虫病9.5%(4/42)，囊虫病4.0%(1/25)，华支睾吸虫病7.4%(2/27)，疟疾0/22。

　　2.3.2　乙肝标志物阳性血清及其他疾病血清　检测阳性率分别为：乙肝血清3.2%(3/93)，医院免疫室门诊血清2.8%(3/106)，肝癌血清1份阴性。

　　2.3.3　未知人群血清　检测阳性率分别为： 儿童5.2%(4/77)，中学生3.5%(14/404)，成人3.3%(10/305)。

　　2.4　重现性及特异性证实

　　对首次检测Toxo-IgG阳性的48份血清及阴性的14份血清，相隔1周后重复检测，重现率均为100%。

　　为证实Dot-ELISA检测的特异性，我们用含蛋白量50μg/ml的Toxo-Ag-PBS对9份PCR及Dot-ELISA均为阳性的血清(“＋”4份，“++”5份)作1∶20稀释后，置37摄氏度水浴中和30min后试验，全部为阴性。用包虫抗原和Toxo-Ag同法中和Toxo-IgG阳性的4份包虫病人血清试验，前者Toxo-IgG 1份转阴，3份Toxo-IgG仍为阳性，后者全部转阴。

　　2.5　预致敏Toxo-Ag的白色PVC保存时效

　　将致敏Toxo-Ag的白色PVC板密封于塑料袋中，放4摄氏度8个月后试验，9份阴性血清反应仍为阴性，1份阳性血清为阳性，且反应强度与保存前一致。

　　2.6　Dot-ELISA与ELISA检测效果比较

　　ELISA试剂为兰州兽医研究所产品(广东江门市卫生防疫站提供)，按说明书操作。二法平行检测PCR证实为Toxo阳性的血清7份，Dot-ELISA阳性率7/7，商品ELISA试剂检测的阳性率5/7。用商品ELISA试剂检测Dot-ELISA-Toxo-IgG为阳性的血清，阳性率75.0%(15/20)。